长循环靶向丝裂霉素壳聚糖纳米粒的制备及药效学研究：实验部分的实验仪器和材料；实验仪器的名称和型号；厂家电子分析天平移液管数显恒温磁力搅拌器冷冻干燥机细胞粉碎机超声波清洗机场发射扫描电镜红外光谱仪电位-粒度分析仪透析袋旋转蒸发器恒温振荡箱北京赛多利仪器有限公司常州国华仪器厂公司宁波新智生物科技有限公司上海汉科科学仪器有限公司德国公司美国公司、 公司实验主要试剂和材料第二章功能化壳聚糖载药纳米颗粒的制备和表征实验方法溶液的制备壳聚糖母液的制备通过向烧杯中加入乙酸，通过磁力搅拌纯水，并完全溶解来制备壳聚糖。 三聚磷酸钠溶液将三聚磷酸钠溶解在纯水中得到的三聚磷酸钠溶液。乙酸缓冲乙酸钠溶液与乙酸混合。用于更正。将茚三酮显色溶液、茚三酮和还原茚三酮沸腾蒸馏水溶解，得到黄色溶液。将维生素溶解在温热的蒸馏水中，同时搅拌，将维生素溶液滴入茚三酮溶液中，沉淀将继续。滴定完毕，继续搅拌，然后放入冰箱冷却过滤沉淀，冷水洗涤，放入五氧化二磷真空干燥器中干燥备用。质量比、反应时间和粒径的影响将壳聚糖母液稀释到上述溶液中，在烧杯中剧烈搅拌，并按照质量比缓慢加入三聚磷酸钠溶液，以进行整个反应。通过激光粒度分析仪测量每个样品的粒度和电势。戊二醛用量对壳聚糖纳米粒的影响戊二醛用量对壳聚糖纳米粒形貌的影响将壳聚糖母液稀释到上述溶液中，在烧杯中剧烈搅拌，按质量比缓慢加入三聚磷酸钠溶液，反应得到物理交联的壳聚糖纳米粒。按戊二醛与氨基摩尔比添加戊二醛的靶向丝裂霉素壳聚糖纳米粒的制备及药效学研究：溶液搅拌均匀后，放入恒温振荡箱中反应。将一滴颗粒溶液滴在硅晶片上，干燥，然后通过扫描电子显微镜观察纳米颗粒的形态。戊二醛用量对壳聚糖纳米粒子表面氨基数量的影响：纳米粒子的制备；将壳聚糖母液稀释到烧杯中的上述溶液中；剧烈搅拌；按质量比缓慢加入三聚磷酸钠溶液；反应得到物理交联的壳聚糖纳米粒子。将按戊二醛与氨基的摩尔比加入的戊二醛水溶液搅拌均匀，然后置于恒温振荡箱中反应，用1号玻璃砂芯漏斗过滤除去絮状沉淀，离心上清液沉淀除去上清液沉淀。使用细胞破碎剂在水中超声分散，分批加入过量的硼氢化钠以还原席夫碱，并除去过量的戊二醛。室温反应用于离心分离以除去上清液沉淀，超声分散用于除去过量的硼氢化钠。最后，通过透析除去过量的壳聚糖纳米颗粒以获得稳定的壳聚糖纳米颗粒。冷冻干燥法测定纳米粒子溶液的浓度，将四种粒子固定在茚三酮检测法的紫外标准曲线上。分别取标准组氨酸溶液离心管，加水补足至涡旋搅拌混合。将各种浓度的组氨酸标准溶液置于圆底烧瓶中，然后加入醋酸缓冲液和茚三酮显色液盖住瓶口，水浴加热搅拌，加入乙醇稀释，摇匀稀释数次，用分光光度计测定。画一条标准曲线。氨基数目的测定取待测颗粒，加入装有醋酸缓冲液和茚三酮显色液的圆底烧瓶中，盖住瓶口，水浴加热搅拌，移至离心管中。用乙醇清洗圆底烧瓶两次 最后收集沉淀，冻干得到叶酸活性酯【将反应液滴入二氯甲烷中，离心上清液除去二氯甲烷。剩余的液体用蒸馏水稀释，并置于透析袋的分子量截止值中进行透析。将透析液冷冻干燥，得到所需的叶酸修饰反应过程，如图所示。根据戊二醛与氨基的摩尔比，按照程序反应制备壳聚糖纳米粒。取壳聚糖纳米粒子，加入室温下反应。分子量截止值为的透析袋透析后长循环靶向丝裂霉素壳聚糖纳米粒的制备及药效学研究。从而获得改性的纳米粒子。改性壳聚糖纳米粒的表征：用一定量的干燥的、叶酸活性酯、混合均匀的片剂进行红外表征。空白纳米粒子修饰的纳米粒子在离心管中冷冻干燥，然后压片用于红外表征。用电位粒径分析仪检测改性前后壳聚糖纳米粒粒径和电位的变化。丝裂霉素壳聚糖纳米粒制备标准曲线的测定准确称量稀释于水中的溶液的吸光度，并绘制标准自闭线。不同剂量对载药纳米粒包封率和载药量的影响：加入琥珀酸酐和吡啶超声溶解，然后置于恒温振荡箱中振荡反应，用TLC判断反应结束。取出减压蒸馏除去吡啶，然后加入缓冲液得到不同浓度的琥珀酰化，用紫外吸光度测定浓度。将琥珀酰化溶液配制成。将上述溶液分别加入到改性壳聚糖纳米粒子溶液中，然后按质量比加入到上述溶液中，室温下反应，得到载丝裂霉素纳米粒子。将纳米颗粒放入透析液中，结合透析液的紫外检测。根据以下公式计算载有丝裂霉素的壳聚糖纳米颗粒的体外释放。取琥珀酰化输入的纳米颗粒悬液，移入分子量截止的透析袋中，然后浸入恒温振荡箱中，每隔一段时间缓慢振荡透析液，再加入等量同值的磷酸盐缓冲液。用紫外分光光度计测定不同时间点透析液的吸光度，绘制药物释放曲线。结果和讨论质量比、反应时间、粒度和电势的影响如表所示。质量比的增加对所制备纳米粒子的粒径有一定的影响，呈现出先减小后增大的趋势。其中比率等于】。这种现象的原因可以解释为：离子交联剂的结构中存在一个位点，可以与其上的氨基发生正负交联。因此，当质量比等于不完全和多余氨基的质量比时，粒径会增大，当该比值小于壳聚糖纳米粒子的质量比时，会在一定程度上相互交联，导致粒径增大。而且表格还显示，电位会随着比例的增加而增加，说明纳米颗粒表面的氨基数量增加了。表不同质量比对纳米粒平均粒径和电位的影响长周期靶向载丝裂霉素壳聚糖纳米粒的制备及药效学离子交联法是通过一种带正电荷的离子和另一种带负电荷的离子之间的分子内和分子间交联凝胶法制备所需粒径颗粒的方法。反应时间是影响反应完全的重要条件。本实验研究了不同时间对纳米颗粒粒径的影响。如表所示，随着时间的增加，粒径缓慢增大。这可能是由于一方面反应逐渐完成，另一方面最初的小颗粒通过交联结合成大颗粒。不同反应时间对纳米粒子平均粒径的影响。为了研究对纳米颗粒粒径的影响，通过预试验，它 结果还表明，粒径越小，随时间的变化越小。第二章功能化壳聚糖载药纳米粒的制备及表征不同反应时间对纳米粒平均粒径的影响戊二醛含量对壳聚糖纳米粒的影响戊二醛含量对壳聚糖纳米粒形貌的影响